2022年2月8日

用于敏感微生物分析的耐热荧光素酶

改良的耐热X-Shining™荧光素酶允许敏感的生物发光环境监测,ATP测试和微生物分析中的细菌鉴定。


碳合成物的耐热改性X-Shining™荧光素酶是完全适合任何荧光素-基于荧光素的检测使用d -荧光素(dLuc)或合成前荧光素(笼内荧光素)。其典型应用的例子包括卫生监测中的ATP测试,药物筛选中的ATP测试和微生物分析中的细菌鉴定。这种强大的荧光素酶已通过基因工程优化,大大增加了热稳定性和存储稳定性。X-Shining™荧光素酶提供lyophilised (BX180145)或作为一个甘油水溶液(BX174908).高度稳定,可以在室温下保存几个月而没有明显的功能损失。

突出的热稳定性

在温度压力测试中,这种酶能在60°C的温度下存活一个多小时,而来自萤火虫的正常荧光素酶仅在几分钟后就失活了。这使得它更加人性化,并消除了常用野生型荧光素酶的一些主要缺点和限制。通过结合基因工程、蛋白过表达和纯化技术,我们生产了>90%纯度的荧光素酶,甚至比野生型更具有成本效益。

图1:60℃保存后X-Shining™荧光素酶和野生型重组荧光素酶(来自Photinus pyralis)的热稳定性比较。X-Shining™荧光素酶完全保留其活性60°C 60 min后,标准荧光素酶在10分钟后完全灭活.此外,与来自萤火虫的重组野生型荧光素酶相比,X-Shining™的发光信号稳定性显著提高(数据未显示)。

应用程序

1) ATP化验

三磷酸腺苷(ATP)存在于所有活细胞中,在能量平衡中起着核心作用。细胞内的ATP浓度受到严格的调节,并在所有细胞中保持在相似的水平。当细胞死亡时,ATP被完全降解;因此,ATP水平可以反映任何活细胞的存在。以生物发光为基础的检测方法非常敏感;一个标准的光度计可以检测到0.1皮摩尔的ATP。

图2:X-Shining™荧光素酶结合D-Luciferin在0.1 mL液体体积的96孔板测定中,ATP浓度范围从8 fmol到1 nmol,显示了良好的信号线性。

2)酶活性测定

荧光素酶生物发光也可用于超灵敏检测广泛的酶活性,使用d -荧光素或氨基荧光素与酶活性基团,如底物。以荧光素为基础的底物在文献中被称为“笼状荧光素”或“前荧光素”。例如,荧光素前可用于检测特定的细菌群,用于动物细胞或植物生物学的报告基因分析。

图3:酶活性检测使用荧光素-荧光素酶的微孔板(左)或试管检测(右)格式。

您可以了解更多关于Biosynth Carbosynth的X-Shining™荧光素酶在这里

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通讯的研究人员

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