2022年4月21日

PCR与QPCR aka端点或实时

PCR（聚合酶链反应）可能是当今科学世界中最热门的方法之一。从1983年开始，作为放大DNA的一种简单方法，现在具有许多不同的变化和无限的应用程序可能性。截至目前，PCR达到了“黄金标准”状态，并且是具有难以精确度和可靠性的分子诊断方法中最应用的方法。PCR通常应用于传染病诊断，但遗传学，肿瘤学，产前筛查。我们怀疑PCR发明家是否会猜到这将成为最终转移整个医疗保健行业的方法。如今，使用相同的PCR反应，我们基本上能够在几分钟内检测到任何东西，这是医疗专业人员手中的强大且不可替代的工具。

最受欢迎的变体可能是常规的PCR AKA端点PCR和QPCR，也称为实时PCR或RT-PCR。为了避免任何混乱，我们将使用端点PCR和QPCR。

这两种变化都有非常相似的一般机制。首先，您需要纯化的DNA（不是强制性的，但建议）。PCR反应的较大部分发生在三个主要步骤中，重复约20-40次。

1. DNA链的变性 - 将DNA加热至〜95°C，其中DNA双螺旋分为两个单独的DNA链。
2. 退火 - 温度降低至约55°C，因此底漆可以连接到单个链上。
3. 伸长（也用作延伸） - 温度再次升高至〜72°C，以便DNA聚合酶可以在第一步之后我们拥有的每个DNA链中创建互补链。

端点PCR和qPCR之间的差异

当然，端点PCR和QPCR之间存在差异。端点PCR通常用于定性目的检测基因组片段（是否存在）。所有PCR循环都完成后，在末尾分析结果。琼脂糖凝胶电泳或基于杂交的微芯片分析通常用于结果分析，因为它允许可视化结果。端点PCR（标准或快速骑自行车，常规或热点等）也有许多变化 - 在为实验选择合适的产品时，您必须注意这些变化。（以下有关此信息的更多信息。）

然后，我们有QPCR，该QPCR主要用于定量目的，以检测，量化和表征基因组片段。借助荧光染料或报告基因探针在反应期间实时收集结果。与端点PCR相比，QPCR的耗时较小，不需要与琼脂糖凝胶混乱，并且分辨率更高。像端点PCR一样，它有许多变化需要考虑：染料或探针，标准或快速等。

选择什么，PCR或QPCR？

如果阅读有关不同机制的内容并没有给您任何应该用于实验的线索，那么这里有一些示例可能会使选择更容易。如果您有兴趣克隆，基因分型，测序，发现患者是否存在某种疾病，是否确实是父亲，您可以使用端点PCR，无论您是否与木乃伊有关，还是犯罪嫌疑人犯罪。

如果您对基因表达分析，传染病，癌症，食物和水安全（包括GMO）更感兴趣，则应尝试QPCR。当然，在大多数情况下，可以两者都使用，因此选择确实取决于您。

您是否决定使用端点PCR或qPCR您可以在Solis Biodyne的产品列表中找到所需的一切，这也使您有可能尝试端点PCR和QPCR的不同变体，并选择最适合您的最适合。